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尼康显微镜柯勒照明的对准方法
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北京澳门新萄京最大平台科技

时间 : 2020-12-31 16:39 浏览量 : 2

   光学显微镜中最容易被理解且经常被忽略的概念之一可能是显微镜在照明方面的正确配置,这是实现最佳性能必须满足的一个关键参数。照明源发出的光的强度和波长光谱非常重要,但更重要的是,将从灯丝上不同位置发出的光收集起来并聚焦在聚光镜孔径光阑的平面上。本交互式教程介绍了实现柯勒照明所需的灯丝和聚光镜对准程序。

   

   本教程以出现在虚拟尼康显微镜视口中的随机选择的标本图像以及通过光学序列的可变数量的照明进行初始化,该照明的强度级别取决于灯丝的(随机)初始化状态。本教程使用两个窗口,可以使用“细丝对齐”和“聚光镜对齐”单选按钮访问(切换)它们。假定虚拟显微镜使用10倍物镜对初始选择时随机选择的样本或使用“选择样本”下拉菜单进行成像。该复位按钮可用于重新初始化教程(选择新的样品和灯丝位置),而无需重新加载浏览器。

   为了操作本教程,请首先选择“灯丝对齐”单选按钮以在显微镜视口中显示灯丝。可以使用(三个)滑块的“灯丝控制”组来调节灯的强度(从零到12伏),聚焦(灯沿光轴的位置)以及灯相对于灯箱的旋转轴。。此外,“细丝位置”滑块沿着虚拟显微镜的x和y轴横向平移细丝。

   将灯丝定心,聚焦并使其达到约9.0伏的工作电势后,单击“聚光镜对准”单选按钮以查看样本和聚光镜调节控制滑块。如果灯泡的灯丝已正确调整,则无论聚焦状态,聚光镜高度或视场光阑开口大小如何,均应均匀照射样品。要对准聚光镜,请先使用“标本精细聚焦”滑块聚焦标本,然后使用“聚光镜高度”滑块将视场光圈虹膜叶对准焦点。接下来,使用“聚光镜横向调整”滑块将视场光阑的光圈开口平移到视口的中心。最后,使用膜片开口尺寸滑块可将视场膜片打开至最大尺寸。如果光圈偏心打开,请使用x平移和y平移滑块将开口置于视野的中心。或者,可以将鼠标光标放在小窗口(包含一组十字准线)中,并用于将视场光阑的图像(显示为白色圆圈)拖动到中心。在灯丝已正确对准并针对K?hler照明调整了虚拟显微镜之后,可以使用“聚光镜孔径”;滑块来模拟数值孔径的变化如何影响样品对比度和分辨率。

   1800年代后期,August K?hler博士首先描述了目前公认的显微镜照明方法,并且在100多年后仍广泛(几乎专门)用于现代显微镜。科勒的技术需要聚光镜在灯室内或附近,可以调节以将灯丝的图像聚焦在孔径光阑所在的聚光镜的前焦平面上。如果灯丝图像正确居中并完全充满光圈,则样品平面的照明将明亮且均匀。为了确保灯丝图像出现在聚光镜焦平面上,必须经常调整聚光镜本身的高度(本教程中介绍的一种技术)。这项关键的调整将两组共轭焦平面(称为场组和光圈组)带入显微镜光学系统内的精确物理位置,并最大限度地提高了仪器的性能。

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